活化凝血時間測定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge，402-03
注冊證編號：國械注進20172401652
注冊人名稱：美敦力公司Medtronic Inc.
注冊人住所：710 Medtronic Parkway N.E., Minneapolis, MN 55432, USA
生產地址：18501 East Plaza Drive, Parker, CO 80134-9061, USA
產品名稱：活化凝血時間測定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge
管理類別：第二類
活化凝血時間測定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge，402-03型號規(guī)格：產品型號：402-03，產品規(guī)格：50人次/盒。
活化凝血時間測定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge，402-03結構及組成/主要組成成分：高嶺土、氯化鈣、HEPES緩沖液和疊氮鈉。（具體內容詳見說明書）
活化凝血時間測定試劑盒（凝固法）HR-ACT Cartridge，402-03適用范圍/預期用途：該產品用于體外定量測定全血中活化凝血時間。 產品儲存條件及有效期：2～25℃保存，有效期為8個月。
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質、蛋白質、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交聯(lián)或者斷裂，引起細胞結構和功能的破壞，與機體衰老和病變有很密切的關系，清除超氧陰離子自由基的研究已經得到了廣泛的關注。生物體內的分子氧可以經過單電子還原轉變?yōu)槌蹶庪x子自由基(O2-)，超氧陰離子自由基既可以直接作用于蛋白質和核酸等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態(tài)氧、過氧化氫及脂質過氧物自由基等對細胞結構和功能具有破壞作用的活性氧。
Leagene超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺比色法)又稱超氧陰離子產生速率檢測試劑盒，其檢測原理是在酸性條件下，2份O2-與羥胺反應生成1份NO2-，NO2-在對氨基苯磺酸和萘胺的作用下反應生成粉紅色的偶氮物質，以分光光度計測定530nm處吸光度，在一定范圍內顏色深淺與O2-成正比，根據A530及NO2-和O2-的相關反應中物質的量的關系，可算出樣品中O2-的濃度。該試劑盒主要用于測定植物組織中的超氧陰離子自由基含量或超氧陰離子的產生速率及清除能力。該試劑盒僅用于科研域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
活化凝血時間(ACT)檢測試劑盒(凝固法)自備材料： 1、蒸餾水
2、實驗材料：植物組織(大豆、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等
3、研缽或勻漿器
4、離心管或試管
5、低溫離心機
6、恒溫箱或水浴鍋
7、分光光度計、比色杯 編號 名稱 TO1123 50T Storage 試劑(A): NO2-標準(1mM) 1ml 4℃ 試劑(B): O2- Lysis buffer 125ml 4℃ 試劑(C): 羥胺溶液 30ml 4℃ 試劑(D): 氨基苯磺酸顯色液 30ml 4℃ 避光 試劑(E): 萘胺顯色液 30ml 4℃ 避光 使用說明書 1 份
活化凝血時間(ACT)檢測試劑盒(凝固法)操作步驟(僅供參考)：
1、準備樣品： ①植物樣品：取正�；蚰婢诚碌男迈r植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取 1~1.5g， 加入 2ml 預冷的 O2- Lysis buffer 后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g 離心 10min， 上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存?zhèn)溆谩?nbsp;②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測 定，4℃保存，用于超氧陰離子自由基的檢測。 ③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用 O2- Lysis buffer 進行恰當的稀釋。
2、配制系列 NO2-標準溶液：取出 NO2-標準(1mM)恢復至室溫后，以 NO2-標準(1mM) 按下表繼續(xù)稀釋：
3、O2-加樣：按照下表設置空白管、標準管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意 避免產生氣泡。如果樣品中的超氧陰離子自由基濃度過高，可以減少樣品用量或適當稀 釋后再進行測定，樣品的檢測好能設置平行管。
4、O2-測定：以空白調零，比色杯光徑 1cm，分光光度計測定標準管、測定管 530nm 處 吸光度(即為 A 標準、A 測定)。
計算： 以系列 NO2-標準(1~6 號)含量(μM)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，制作標準曲 加入物(ml) 1 2 3 4 5 6 NO2-標準(1mM) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 蒸餾水 0.99 0.98 0.97 0.96 0.95 0.94 NO2-含量(μM) 10 20 30 40 50 60 加入物(ml) 空白管 標準管 測定管 蒸餾水 1 — — 系列 NO2-標準(1~6 號) — 1 — 待測樣品 — — 0.25 O2- Lysis buffer — — 0.25 羥胺溶液 — — 0.5 混勻，25℃水浴孵育 20min。 氨基苯磺酸顯色液 0.5 0.5 0.5 萘胺顯色液 0.5 0.5 0.5 混勻，30℃水浴孵育 30min。根據測定管的吸光度進而計算 NO 2-含量。
根據如下公式計算具體樣品中超氧陰離子自 由基(O2-)的含量： 植物組織樣品 O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS) 血清、尿液等樣品 O2-(μM/ml)=2×n×N/VS 超氧陰離子的產生速率的定義：每分鐘每克鮮重組織產生的超氧陰離子的物質的量，計 算公式如下： 超氧陰離子產生速率【μmol/(min*g)】=2×n×VT/(W×t×VS) 測得樣品中蛋白質含量后，可用下面公式表示： 超氧陰離子產生速率【μmol/(min*mg)】=2×n×VT/(m×t×VS) 式中：2=NO2-與 O2-間的化學計量數 n=從標準曲線上查得的 NO2-含量(μM) VT=超氧陰離子自由基提取液總體積(ml) N=樣品稀釋倍數 W=樣品鮮重(g) m=樣品中蛋白質含量(mg) t=樣品與羥胺的反應時間(min)=20 VS=測定時加入提取液體積(ml)
活化凝血時間(ACT)檢測試劑盒(凝固法)注意事項：
1、 實驗材料應盡量新鮮，如取材后不立即使用，應存于 4℃。
2、 如果樣品中含有較多的葉綠素，會干擾測定結果，可在加入羥胺溶液 25℃水浴孵育 20min 后用等體積三氯甲烷萃取葉綠素，再行顯色反應。
3、 如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標儀測定，但應考慮酶標儀的大檢測體積。
4、 所測樣本的濃度過高，應用 O2- Lysis buffer 稀釋樣品后重新測定。
5、 氨基苯磺酸顯色液和萘胺顯色液有強烈的刺激性，盡量在通風條件好的地方操作，用后 需擰緊瓶蓋，避免揮發(fā)。
有效期：6 個月有效。4℃運輸，4℃保存。
活化凝血時間(ACT)檢測試劑盒(凝固法)相關產品： 附：參考標準曲線范圍： Leagene 測定 NO2-標準 10、20、40、60、80、100、120、140、160、180、200μM 在 530nm 的吸光度，據此做出其標準曲線如下： 根據結果可以看出 NO2-標準在 160μM 以上時，OD 值會有偏差，因此樣品的 O2-應小于 320μM
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